تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان)

مجمة جامعة تشرين لمبحوث والد ارسات العممية _ سمسمة العموم البيولوجية المجمد )38( العدد )6( 2016 Tishreen University Journal for Research and Scientific Studies - Biological Sciences Series Vol. (38) No. (6) 2016 تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان) د ارسة مقارنة( د. محمد خضر مرة * د. حسن محمد سممان** ندى ياسين ديب *** )تاريخ اإليداع.2016 / 3 / 10 قبل لمنشر في )2016 / 11 / 20 ممخ ص أجريت الد ارسة الحالية عمى عينات دم تعود ل 15 مريضا ( 12 ذكور, 3 إناث ) ممن شخصت إصابتيم بالميشمانيا الجمدية و ثبت شفاؤىم منيا بعد الخضوع لمعالج الموضعي. وأجريت اختبا ارت الد ارسة عمى مرحمتين: األولى بعد الخمج, والثانية بعد شيرين عمى األقل من الشفاء. وخضع كل مريض في كال المرحمتين لالختبا ارت اآلتية: التعداد الكمي والعد التمييزي لخاليا الدم البيض, وقياس قيمة الييماتوكريت. إضافة لذلك, تم إج ارء د ارسة لمتغي ارت المورفولوجية لخاليا الدم البيض لممصابين. أظيرت نتائج المرحمة األولى ارتفاعا معنويا في متوسط تعداد الممفاويات والحمضات ( 0.05>P( ت ارفق مع انخفاض معنوي) ذو داللة إحصائية( في متوسط التعداد الكمي لخاليا الدم البيض ونسبة العدالت )0.01>P( ومتوسط قيمة الييماتوكريت ) P<0.01 (مقارنة مع القيم الطبيعية. أما في المرحمة الثانية فقد بينت النتائج عودة نسبة خاليا الدم البيض إلى قيميا الطبيعية حيث لوحظ انخفاض معنوي في تعداد الحمضات ( 0.05>P( وانخفاض غير معنوي في تعداد الممفاويات) 0.05<P(, وكذلك ارتفاع غير معنوي في التعداد الكمي لخاليا الدم البيض ( 0.05<P(. كما أظيرت المقارنة بين نتائج المرحمتين األولى والثانية فروقا معنوية في التعداد الكمي وتعداد الحمضات, بينما لم تكن ىذه الفروق معنوية بالنسبة لمعدالت, والممفاويات, والوحيدات )0.05<P (. أما بالنسبة لمد ارسة المورفولوجية الخموية فمم تظير النتائج أي اختالف جوىري بين خاليا الدم البيض لدى األشخاص المصابين وغير المصابين بالميشمانيا الجمدية. الكممات المفتاحية: الميشمانيا الجمدية, خاليا الدم البيض, الييماتوكريت,الحمضات. * أستاذ - قسم عمم الحياة الحيوانية- كمية العموم -جامعة تشرين- سورية. **أستاذ - قسم عمم الحياة الحيوانية- كمية العموم- جامعة تشرين- سورية. ***طالبة ماجستير - قسم عمم الحياة الحيوانية- كمية العموم -جامعة تشرين- سورية. 271

تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان مرة, سممان, ديب مجمة جامعة تشرين لمبحوث والد ارسات العممية _ سمسمة العموم البيولوجية المجمد )38( العدد )6( 2016 Tishreen University Journal for Research and Scientific Studies - Biological Sciences Series Vol. (38) No. (6) 2016 Formula And Morphological Changes of White Blood Cells in Human during infection and after healing from Cutaneous Leishmaniasis(comparative study) Dr. Mohammad Morra * Dr. Hasan Salman** Nada Deeb*** (Received 10 / 3 / 2016. Accepted 20 / 11 / 2016 ) ABSTRACT The present study was performed on blood samples belong to 15 patients( 12 males,3 females) infected with cutaneous leishmaniasis, and their healing was also proved after submitting local treatment. Study tests were performed on 2 stages, the first after infection, and the second two months at least after healing. Every patient was subject of the following tests: total, and differential white blood cells count and hematocrit value. In addition,a study of the morphological changes of white blood cells was conducted. The results of the first stage have showed a significant increasing in lymphocytes and eosinophils mean percent) P<0.05) accompanied with significant decreasing in total white blood cell count, neutrophils mean percent(p<0.01), and mean hematocrit value (P<0.01) in comparing with the normal values. In the second stage of study, the results have demonstrated a reconversion of white blood cells mean percent into their normal levels,whereas a significant decreasing in eosinophils mean percent (P<0.05), and no significant decreasing in lymphocytes mean percent (P>0.05), and also no significant increasing in total blood cell count(p>0.05). Comparison between the results of the two stages have showed a significant difference in total white blood cell count, and eosinophils count, while these differences were not significant for neutrophils,lymphocytes, and monocytes(p>0.05).. Concerning the cell morphological study, the data have not showed any noticeable differences between white blood cells of infected and uninfected human with cutaneous leishmaniasis. Key words: white blood cells, hematocrit, lymphocytes, eosinophil's. * Professor in Department of Animal Biology- Faculty of Sciences -Tishreen University-Syria. ** Professor in Department of Animal Biology-faculty of Sciences -Tishreen university-syria. *** Master Student in Department of Animal Biology-faculty of Sciences - Tishreen University-Syria. 272

Tishreen University Journal. Bio. Sciences Series مجلة جامعة تشرين العلوم البيولوجية المجلد )38( العدد )6( 2016 مقدمة: ي عد طفيمي الميشمانيا Leishmania من الحيوانات األوالي الطفيمية Parasitic Protozoa ينتمي إلى السوطيات الدموية Haemoflagella إجبارية التطفل ( Aoun,2014 )Sharma et al; 2009; ويسبب ثالث مظاىر مرضية ىي: الميشمانيا الجمدية Cutaneous Lieshmaniasis والميشمانيا الجمدية المخاطية Matte 1999 )سممان Visceral Leishmaniasis والميشمانيا الحشوية,Mucocutaneous Leishmaniasis Olivier2002,.)And تنتشر ىذه األم ارض في أكثر من 88 دولة من قا ارت العالم الخمس, وبخاصة المناطق المدارية وشبو المدارية, وكذلك دول حوض البحر األبيض المتوسط ومنيا سوريا), WHO2007 سممان (, 2001 حيث يقدر عدد اإلصابات سنويا بحوالي 1.5 مميون إصابة بالميشمانيا الجمدية, ونصف مميون إصابة بالميشمانيا الحشوية ( al.;2004 )Awasthi et al., ;2004 Queiroz et وت عد الميشمانيا الجمدية األوسع انتشا ار في سوريا, وىناك ما يفوق ال 20 نوعا من الطفيمي تنتقل إلى العائل المضيف بوساطة أكثر من ثالثين نوعا من الذبابة الفاصدة لموريد األنثىPhlebotomus (Chappuis et al,(2007 التي تتميز بمونيا المصفر وحجميا الصغير, وتواجدىا في األماكن الرطبة والمظممة, ونشاطيا الميمي) al.,2007.)sharma et al.,2008; Reithinger et لقد بات من المعموم أن األخماج الطفيمية عموما, والخمج بطفيمي الميشمانيا خصوصا تسبب تغي ارت في نسب خاليا الدم البيض في موضع اإلصابة خالل فترة الخمج ( 2011,. Issabeagloo,)Matte et al., ;2002 وتختمف ىذه التغي ارت تبعا لعوامل متنوعة, منيا نوع الطفيمي الخامج وفوعتو, ومكان ونوع الخمج, ونوع الثوي ومقاومتو المناعية 2005(.) Awasthi et al., 2004; Olivier لقد أظيرت العديد من الد ارسات والبحوث العممية التي اىتمت بالتغي ارت التي تط أر عمى أعداد خاليا الدم البيض في األخماج الجمدية الموضعية ( 2000 Kemp, )Behm et al.,2000; أن الطفيمي يحرض توافد العدالت والحمضات إلى موضع الخمج خالل المرحمة األولى منو, يمي ذلك تنشيط البالعات الكبيرة وازدياد في عدد الممفاويات 2002( al.,.) Anderson et al.,2007; Vergel et al., 2006 ; Arabi et وبالرغم من اىتمام العديد من الد ارسات األخرى بتحديد أنماط السيتوكينات Cytokines المتحررة والم ارفقة لكل نمط من أنماط االستجابة المناعية) 1985 ) Lambertz 2012., Bomfim et al 1996., Passwell وباال ليات التي تمكن الطفيمي من النجاة من التخرب والقتل ضمن الخاليا البالعة لمثوي) al.,1999 )Olivier et al., ;2005 Reed et إال أنيا لم تول اىتماما لمتغي ارت التي يمكن أن تحدث في صيغة خاليا الدم البيض المحيطي الم ارفقة لالستجابة المناعية التي تشير إلى احتمال اإلصابة بيذا النوع من الطفيمي أو ذاك. أظيرت نتائج د ارسة سابقة عمى اإلنسان )ديب وا خرون ) 2015 انخفاضا معنويا في التعداد الكمي لخاليا الدم البيض وفي نسب العدالت وقيم الييماتوكريت 0.05>P. كما بينت ذات الد ارسة ارتفاعا معنويا لنسب كل من الحمضات والممفاويات 0.05>P خالل الخمج بالمشيمانيا الجمدية, لذلك ىدفت الد ارسة الحالية إلى استقصاء ومتابعة التغي ارت في صيغة خاليا الدم البيض في الدم المحيطي بعد الشفاء الظاىري من المرض بفترة زمنية تت اروح ما بين 2-3 أشير. إضافة لذلك, تم تقصي التغي ارت الشكمية الخموية التي يمكن أن تط أر عمى خاليا الدم البيض عند األشخاص المصابين بالخمج. 273

تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان مرة, سممان, ديب أىمية البحث وأىدافو: تأتي أىمية البحث الحالي من كونو يبرز التغي ارت في صيغة خاليا الدم البيض قبل العالج من الخمج بالميشمانيا الجمدية ويقارنيا مع التغي ارت ذاتيا بعد العالج. ولذا فقد ىدفت الد ارسة الحالية إلى اال تي: د - ارسة نسب األنواع المختمفة لخاليا الدم البيض في عينات دم المرضى, وذلك خالل مرحمتين: األولى بعد اإلصابة )قبل العالج( والثانية بعد الشفاء ومقارنة نسب األنواع المختمفة لمخاليا البيض لكل مرحمة مع القيم الطبيعية المعروفة عالميا ) 2004 al.,.(theml et عالميا. الدم المحيطي. - مقارنة نسب خاليا الدم البيض بين المرحمتين المذكورتين وأىميتيا احصائيا. د - ارسة تغي ارت قيم الييماتوكريت لدى المصابين بين المرحمتين, ومدى اختالفيا عن القيم الطبيعية المعروفة - تقصي تأثير الخمج بالميشمانيا عمى التغي ارت المورفولوجية التي يمكن ان تط أر عمى خاليا الدم البيض في ط ارئق البحث و مواده: شمل البحث )15( شخصا من الم ارجعين لمركز الميشمانيا في مدينة الالذقية ممن ثبتت إصابتيم بالميشمانيا الجمدية, وفقا لمطريقة اآلتية: 1- أخذت مسحة جمدية من منطقة اإلصابة وثبتت بالميتانول, ثم لونت بممون جيم از,Gimsa وفحصت تحت المجير باستعمال العدسة الغاطسة لمتأكد من وجود الطفيمي. خضع المرضى بعد انتياء فترة عالجيم بشيرين أو أكثر إلى اختبار جمدي موضعي أظير شفاءىم. تم الحصول عمى عينات من الدم المحيطي أثناء الخمج بالميشمانيا و بعد الشفاء منو. 2- س حبت بعد ذلك من كل مريض ثبتت إصابتو عينتان من الدم مقدار كل منيا 2.5 مضاف إلييا 100 ميكروليتر من مانع التخثر.EDTA تم اج ارء تحميل لعينات الدم المحيطي بإتباع الخطوات اآلتية: 3 مم جمعت في أنابيب 1- أجري قياس ىيماتوكريت الدم حيث تم تثفيل الدم في األنابيب الشعرية الخاصة بالييماتوكريت لمدة خمس دقائق بسرعة ( 3000( دورة /دقيقة. شريحة 2- ح ض رت خاليا الدم باستخدام محمول حمض الخل الممدد نيوباور لعد خاليا الدم البيض( 2000 (Estridge et al. %2, تاله إج ارء عد يدوي إجمالي باستخدام 3- حض رت لكل مريض مسحة دموية رقيقة ثبتت بالميتانول لمدة دقيقتين ثم لونت بممون اريت لمدة خمس دقائق ثم جففت وأجري العد التفريقي ألنواع خاليا الدم البيض تحت العدسة الغاطسة بتك اررية مناسبة لكل مسحة وأعتمد متوسط العد( 2000.(Estridge et al 5- تم إج ارء الد ارسة المورفولوجية وتقصي التغي ارت السيتوبالسمية لخاليا الدم البيض عمى مسحات الدم التي استخدمت لمعد التفريقي والتقطت الصور باستخدام كامي ار من نوع Olympus مثبتة عمى المجير. 274

Tishreen University Journal. Bio. Sciences Series مجلة جامعة تشرين العلوم البيولوجية المجلد )38( العدد )6( 2016 4 -أجريت الد ارسة اإلحصائية باستخدام البرنامج اإلحصائي,SPSS اإلصدار SPSS) 19.(Version 19 النتائج والمناقشة: - - - 1 1 2 تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض تم إج ارء االختبا ارت اإلحصائية اال تية وىي: اختبار ستودنت لممقارنة بين متوسطات متغي ارت الد ارسة قبل العالج والقيم المعيارية الثابتة, تاله إج ارء اإلختبار ذاتو لممقارنة بين متوسطات متغي ارت الد ارسة والقيم الطبيعية أيضا. وحيدات اختبار ستودنت لممقارنة بين متوسطات معايير الد ارسة قبل العالج و بعد الشفاء. )ي شار إلى أن القيم األقل من 0,05 ىي التي اعتمدت ىامة احصائيا ا(. و كانت نتائج الد ارسة اإلحصائية كاال تي : الجدول )1(: يبين نتيجة اختبار ستودنت ت Oneقبل Sample T Test العالج بالمقارنة مع القيم المعيارية الثابتة. حمضا عدالت لمفاويات الت عداد الكمي ىيماتوكريت 0.01>P **,0.05>P* 45% 7000 35 % 57 % % 3 % 4 القيمة العيارية Mean± Std 36.47±10.5 5300±1750 46.00±10.9 44.93±11.25 4.60±2. 16 3.86±2.2. 61 قبل بدء العالج One Sample T Test Sig 0.007 ** 0.002 ** 0.002 ** 0.001 ** 0.013 * 0.846 الجدول) 2(: يبين نتيجة اختبار ستودنت One Sample T Test بعد العالج بالمقارنة مع القيم المعيارية الثابتة. وحيدات حمضات عدالت لمفاويات الت عداد الكمي ىيماتوكريت *= P<0.05, **= P<0.0 % 42 القيمة العيارية 7000 35 % 57 % % 3 % 4 Mean± Std 39.95±4.5 6600±1500 41.60±10.32 52.53 بعد الشفاء One Sample T Test Sig ±11.51 2.3±1.49 3.13±1, 0.001 ** 0.296 * 0.155 0.319 0.66 0.027 6 أسسات 1 الجدول) 3 (: يبين نتيجة اختبار ستودنت لمعينات المرتبطة Paired Sample T-Test الختبار الداللة االحصائية لمتوسطات الفروق بين معايير الد ارسة لدى المرضى قبل الخضوع لمعالج ( 1( وبعد الشفاء )2( حمضات / 1 حمضات 2 عدالت 1 / وحيدات 1 / / أسسات 2 وحيدات 2 عدالت 2 لمفاويات / 1 كمي / 1 كمي 2 لمفاويات 2 ىيماتوكريت / 1 ىيماتوكريت 2 المتغير مؤشر T االختبار P-Value **= P< 0.01-1.019- -2.337-1.325-2.250-3.407 1.511-0.939-0.326.035*.206 0.041 *.004 **.153.364 275

تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان مرة, سممان, ديب بينت نتائج االختبا ارت السابقة انخفاضا معنويا في التعداد الكمي لخاليا الدم البيض قبل العالج وزوال ىذا االنخفاض بعد العالج )بعد الشفاء(,حيث أظيرت المقارنة فرقا معنويا بين متوسط التعداد الكمي لممرحمتين )الجدول 3(, وىذا يظير تأثي ار لمشفاء من الخمج عمى التعداد الكمي لخاليا الدم البيض, مع العمم أن د ارسات سابقة بينت أن أمالح األنتموان الخماسية المستخدمة في عالج داء الميشمانيا تسبب انخفاضا في التعداد الكمي لخاليا الدم البيض يت ارفق مع ارتفاع في نسبة الخاليا الممفاوية بالمقارنة مع العدالت ( 2010,. al,)mapar et ويتفق أيضا مع نتائج د ارسات سابقة أظيرت انخفاضا معنويا في التعداد الكمي لخاليا الدم البيض عند المخموجين الذين لم يتمقوا العالج بعد )ديب وا خرون (, 2015 وكذلك مع د ارسة (2014 al.; )Dwivedi et التي أوضحت انخفاضا في متوسط التعداد الكمي لمخاليا البيض عند بعض المصابين بالميشمانيا الجمدية, الشكل )1(. الشكل 1( :) التعداد الكمي لخاليا الدم البيض قبل العالج وبعد الشفاء مقارنة مع المتوسط الطبيعي. تظير الد ارسة الحالية أيضا انخفاضا معنويا في نسبة العدالت بعد الخمج بالميشمانيا الجمدية متوافقا مع نتائج )ديب واخرون 2015 ( )الجدول 1(, ويتوافق كذلك مع نتائج د ارسات سابقة بينت انخفاضا معنويا في تعداد العدالت بتأثير الخمج بالميشمانيا الحشوية ( اسماعيل,.,2004,2004 al.) Rai et al., 2008, Queiroz et إال أن النتائج بينت عودة العدالت إلى قيميا الطبيعية بعد الشفاء, حيث لم نجد فروقا معنوية في قيم العدالت بعد الشفاء مقارنة مع القيم الطبيعية ويتوافق ذلك مع نتائج ) 2012 MIAH, ),الجدول )2( الشكل) 2 (. 276

Tishreen University Journal. Bio. Sciences Series مجلة جامعة تشرين العلوم البيولوجية المجلد )38( العدد )6( 2016 الشكل) 3 (: متوسط نسبة الممفاويات الشكل )2(: متوسط نسبة العدالت إضافة لذلك, أظيرت نتائج الد ارسة الحالية ارتفاعا معنويا في متوسط تعداد الخاليا الممفاوية بعد اإلصابة بما يتوافق مع نتائج العديد من الد ارسات األخرى )ديب واخرون Passwell et al 1985, Miah et al 2015,.2012(, كما بينت د ارسة أخرى )2002 al., ) Darabi et ازديادا في عدد الخاليا الممفاوية التائية المساعدة لدى المصابين بداء الميشمانيا الجمدية المعالجة بالغموكانتيم أو غير المعالجة, وال بد من التنويو أنو بالرغم من االرتفاع المعنوي لنسب الخاليا الممفاوية فقد لوحظ تفاوت واضح في ىذه النسب عند بعض األشخاص موضوع الد ارسة حيث لوحظ ارتفاع أكثر أىمية عند بعض المرضى )بنسبة %33.4 من عدد المرضى, الجدول 5(. تعداد العدالت والممفاويات عند المجموعة األولى من المرضى العدد/العمر النسبة الجنس متوسط نسبة العدالت متوسط نسبة الممفاويات قبل الشفاء: 10 مرضى) 42-14 عام( )%66.6( 3 إناث /7 ذكور 59±5.87 35.5±5.38 الجدول رقم : 5 تعداد العدالت والممفاويات عند المجموعة الثانية من العدد/العمر النسبة الجنس متوسط نسبة العدالت متوسط نسبة الممفاويات المرضى بعد الشفاء: 5 مرضى) 33-20 عام( )%33.4( ذكور 38.60±4.77 53.80±5.40 كما يظير الجدول أعاله, فقد توزعت عينات المرضى بعد الشفاء في مجموعتين, سجل لدى المجموعة األولى ارتفاع في متوسط تعداد العدالت وانخفاض في متوسط تعداد الخاليا الممفاوية, بينما كانت الخاليا الممفاوية ىي السائدة في المجموعة الثانية بعد الشفاء. تشير الد ارسات في ىذا الخصوص إلى أن عدد الخاليا الممفاوية يبقى مرتفعا بعد العالج عند األف ارد الذين يبدون شفاء ظاىريا بحيث تغمب لدييم المجموعة الخموية,TH 2 أما األشخاص الذين تغمب لدييم المجموعة الخموية Bomfim et ( وقد بينت د ارسة )Reithinger et al., 2007; Uzonna et al.,2012( فيشفون شفاء تاما TH 1 277

تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان مرة, سممان, ديب,. 1996 )al أن السيتوكينات المتحررة في حال االصابة بداء الميشمانيا الجمدية تختمف تبعا لالستجابة المناعية التي يسببيا العالج المستخدم. وبحسب النتائج الموضحة في عدد من الد ارسات فإن الخاليا التائية تؤدي دور السيادة في المناعة تجاه طفيمي الميشمانيا حيث تقوم ىذه الخاليا بدور ىام في توليد خاليا الذاكرة التائية المنظمة ويزداد عدد الخاليا المتخصصة بقتل الطفيمي في حال اإلصابة (., al Franklin et al., 1982; Reed et al., 1990; Farah et.)1976 أما ب النسبة لمحمضات, فقد بينت نتائج الد ارسة ارتفاعا معنويا في تعدادىا قبل البدء بالعالج )الجدول (, 1 ويتوافق ذلك مع نتائج د ارسات أخرى أظيرت أيضا ارتفاعا في نسبة الحمضات نتيجة لإلصابة بأخماج جمدية موضعية( ديب و اخرون 2015;2014 ( Rodrıguez And Wilson تاله انخفاض غير معنوي في نسبتيا مقارنة مع القيم الطبيعية بعد الشفاء, في حين أظيرت د ارسة ( عند المرضى الذين لم يستجيبوا لمعالج من الميشمانيا الحشوية, )الشكل 4 والجدول 2(. )Das.,et al 2005 استم ارر االرتفاع في نسبة الحمضات أما بالنسبة لموحيدات فمم ت ظير نتائج اختبار ستودنت أية تغي ارت معنوية في متوسط تعداد الوحيدات قبل العالج, كما لم ي ظير االختبار فروقا معنوية لمتوسط نسبة الوحيدات بعد الشفاء مقارنة مع قيميا قبل العالج (Netto et al., 2006 (0.05<P)) الشكل 5(. وعمى العكس من ذلك فقد أظيرت د ارسة ( الخاليا الوحيدة CD 16 + ازديادا في تعداد مرتبطا مع األع ارض السريرية لمخمج بالمشيمانيا الجمدية, حيث كان االرتفاع في تعدادىا معنويا ومرتبطا مع زيادة حجم الندبة الجمدية. كما تبين في د ارسة أخرى ( 2005,. al )Keles et أن المواد المؤكسدة الناتجة عن االستجابة المناعية تجاه طفيميات الميشمانيا الغازية ت حدث لدى المخموجين تخرب جزئي في دنا الخاليا وحيدة النواة المحيطية peripheral mononuclear cells مقارنة مع األف ارد الطبيعيين. DNA الشكل) 5 (: متوسط النسبة المئوية لموحيدات الشكل )4(: متوسط النسبة المئوية لمحمضات إضافة لذلك, بينت نتائج اختبار ستودنت انخفاضا معنويا في قيمة الييماتوكريت قبل العالج مقارنة مع المتوسط الطبيعي, ويتوافق ذلك مع نتائج د ارسة ديب وا خرون 2015, والتي أظيرت انخفاضا معنويا في قيم الييماتوكريت بعد اإلصابة بالميشمانيا وقد استمر ىذا اإلنخفاض أيضا بعد الشفاء (0.01>p() الشكل 6( ويمكن أن 278

Tishreen University Journal. Bio. Sciences Series مجلة جامعة تشرين العلوم البيولوجية المجلد )38( العدد )6( 2016 يعزى ذلك إلى التأثي ارت الجانبية لممعالجة بأمالح األنتموان الخماسية) )Glucantime وتأثير اإلصابة بالميشمانيا Das.,2005( ) Miah,.2012 في حين سجمت د ارسات أخرى انخفاضا في تعداد خاليا الدم الحمر و قيمة خضاب الدم بتأثير الخمج بالميشمانيا الحشوية )اسماعيل 2008,.2004 (. Queiroz et al الشكل) 6 (: متوسط قيم الييماتوكريت 2 -التغي ارت الشكمية لخاليا الدم البيض بعد الخمج بالميشمانيا الجمدية : بيدف د ارسة التغي ارت الشكمية المحتممة لخاليا الدم البيض أثناء الخمج بالمشمانيا, فقد اىتمت الد ارسة الحالية بمالحظة ومتابعة عدد من العوامل ذات الصمة بالتغي ارت الشكمية لخاليا الدم البيض وبخاصة شكل النواة, والتغي ارت في شكل الغشاء الخموي, والتغي ارت السيتوبالسمية في شكل وتوزع الحبيبات في خاليا الدم البيض المحببة,Granulocytes جسيمات دوىل Dohal Bodies التي تظير في سيتوبالسما العدالت Neutrophils في حاالت األخماج الجرثومية والحروق وحاالت التسمم ( al;2004,(theml et وكذلك التغي ارت المحتممة في سيتوبالسما الخاليا الممفاوية, وقد أجريت الد ارسة عمى مسحات دموية معالجة كما ورد في ط ارئق البحث. 1-2- الحمضات :Eosinophils ظيرت النواة مكونة من ج أزين كبيرين متصمين بخيط كروماتيني, واشتممت السيتوبالسما الخموية عمى عدد كبير من الحبيبات الصغيرة الممونة بالمون الوردي والتي بدت أقرب إلى الحبيبات الطبيعية, بحيث أننا لم نمحظ أي تغي ارت مورفولوجية مقارنة مع الحمضات الطبيعية الموصوفة في الم ارجع العالمية 2004( al; ) Behm et al;2000, Theml et الشكمين) 7 و.)8 الشكل) 7 ) حمضات شخص سميم الشكل) 8( حمضات شخص مصاب 279

تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان مرة, سممان, ديب 2-2- الممفاوياتLymphocytes : أوضحت نتائج الد ارسة أن الخاليا الممفاوية الصغيرة طبيعية حيث تشغل النواة الحيز األكبر من السيتوبالسما الخموية, ولونيا طبيعي ولم يشاىد أي شكل شاذ ألنوية الممفاويات في جميع Irregular عينات الد ارسة, كما لم يمحظ في الغشاء الخموي أية انثناءات أو امتدادات أو أرجل كاذبة Pseudopods كما بدت الممفاويات الكبيرة طبيعية من حيث المون وشكل وحجم النواة, وشفافية السيتوبالسما الخموية في جميع عينات الد ارسة. ( األشكال 12-9(. الشكل) 9 ) لمفاويات صغيرة عند شخص سميم الشكل) 10( لمفاويات صغيرة عند مصاب الشكل) 12( لمفاويات كبيرة عند شخص مصاب الشكل) 11 ) لمفاويات كبيرة عند شخص سميم 3-2 -العدالت :Neutrophils لم تبين نتائج الد ارسة أية تغي ارت غير طبيعية في شكل النواة وعدد الفصوص المكونة ليا إذ ت اروح العدد ما بين 5-3 فصوص في العدالت الناضجة polymorphonuclears دون أي تقطع Segmentation في أج ازء النواة والذي يظير في حاالت مرضية مثل نقص الحديد وفقر الدم ضخم األرومات Megaloblastic واالخماج المزمنة (THEML et al;2000 ( Chronic Infection كما بدت الحبيبات السيتوبالسمية طبيعية من حيث التوزع والحجم والتمون, ولم ي محظ أية فجوات شفافة في السيتوبالسما الخموية. وظيرت 280

Tishreen University Journal. Bio. Sciences Series مجلة جامعة تشرين العلوم البيولوجية المجلد )38( العدد )6( 2016 العدالت غير الناضجة Band Neutrophils التي ال تزيد نسبتيا عن %2 طبيعية ونواتيا تشبو نعل الفرس أو حرف U )األشكال.)14-13 الشكل) 14 (: عدالت شخص مصاب الشكل) 13(: عدالت شخص سميم -4-2 الوحيدات Monocytes: بدت الوحيدات طبيعية من حيث حجم وشكل األنوية واألغشية السيتوبالسمية, وقد لوحظ في عينات الد ارسة وجود وحيدات م فعمة أو نشطة حيث احتوت السيتوبالسما عمى فجوات صغيرة شفافة تعكس الدور النشط ليذه الخاليا في بمعمة طفيمي المشمانيا. )الشكمين 15 و 16(. الشكل )15(: خمية وحيدة طبيعية عند شخص سميم الشكل ( 16(: خمية وحيدة مفعمة عند شخص مصاب تظير في السيتوبالسما عدة فجوات ىاضمة االستنتاجات و التوصيات: 1. يت ارفق الشفاء من الخمج بالميشمانيا الجمدية مع عودة نسب الخاليا البيض إلى قيميا الطبيعية عند بعض المرضى وبقاء نسبة الممفاويات مرتفعة عند بعضيم اآلخر, لذا يوصى بتنميط الممفاويات البائية والتائية بعد الشفاء من الخمج. 281

تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان مرة, سممان, ديب 2. ال يزول االنخفاض في قيمة الييماتوكريت خالل الفترة الزمنية األولى بعد الشفاء من الخمج بالميشمانيا الجمدية, لذا يوصى بإج ارء د ارسة معمقة لألسباب المحتممة ليذا النخفاض وزمن ديمومتو. 3. ال يسبب الخمج بالميشمانيا الجمدية تغي ارت شكمية جوىرية في خاليا الدم البيض.,3 الم ارجع: - اسماعيل, محمد. وبائيات داء الميشمانيا الجمدي في سوريا. مجمة التشخيص المخبري سوريا, المجمد 1 العدد.2004,4 -اسماعيل, محمد الكفري, عبير. مستوى مرتفع النتشار داء الميشمانيات الحشوي لدى سكان سورية 4,العدد 10 د بي- باختبار ىالمLeishmaniasis ID-PaGIA : د ارسة أولية. مجمة التشخيص المخبري سوريا, المجمد, ندى مرة, محمد سممان,حسن. تأثير الخمج بطفيمي الميشمانيا في بعض معايير الدم عند 2.2008, األشخاص المصابين بداء الميشمانيا الجمدية في سوريا مجمة جامعة تشرين لمد ارسات والبحوث العممية.سوريا, 3 المجمد 37,العدد 2015,5. -سممان, حسن. مرض الالشمانيا الجمدية في محافظة طرطوس-سورية) لمد ارسات والبحوث العممية.سوريا, المجمد 21,العدد 8 119-,,1999 136. (. 1997 مجمة جامعة تشرين -سممان, حسن. مرض الميشمانيا الجمدية في محافظة الالذقية الجميورية العربية السورية لعام 1997, أبحاث اليرموك سمسمة العموم األساسية واليندسية, األردن, المجمد 10, العدد 1, 14-9. 2001, 4 5 الم ارجع األجنبية: 1. AWASTHI, A; MATHUR, K; SAHA, B. Immune response to Leishmania infection. Indian J Med Res. India, Vol.119, 2004, 238-258. 2. AOUN,K; BOURATBINE, A. Cutaneous Leishmaniasis in North Africa: Parasite,EDP Sciences, Tunisia, Vol 21, 2014.1-9. 3. ADERSON,C; OUKKA,M; KHUSHROO,V; SACKS,D. CD4+CD25 Foxp3 Th1 cells are the source of IL-10 mediated immune suppression in chronic cutaneous leishmaniasis, The Journal of Experimental Medicine. USA, Vol. 204, No. 2,2007, 285-297. 4. BOMFIM, G; NASCIMENTO,C; COSTA,J; CARVALHO,E; NETTO M ; BARRAL,A. Variation of Cytokine Patterns Related to Therapeutic Response in Diffuse Cutaneous Leishmaniasis, experimental parasitology, Brazil, Vol 84, 1996,188 194. 5. BEHM, C; OVINGTON, K. The Role of Eosinophils in Parasitic Helminthes Infections: Insights from Genetically Modified Mice. Parasitology Today Australia,Vol. 16,NO. 5, 2000,202-207. 6. CHAPPUIS, F; SUNDAR, S; HAILU, A; GHALIB, H;RIJAL,S;PEELING, R;ALVAR, J; BOELAERT, M. Visceral Leishmaniasis: What Are The Needs For Diagnosis, Treatment And Control?., nature reviews microbiology, Switzerland, Vol. 5, 2007, 873-883. 7. DARABI, H; ABOLHASSANI,M; KARIMINIA A, LIMOHAMMADIAN, M. Expansion of γδ T Cells in Patients Infected with Cutaneous Leishmaniasis With and 282

Tishreen University Journal. Bio. Sciences Series مجلة جامعة تشرين العلوم البيولوجية المجلد )38( العدد )6( 2016 Without Glucantime Therapy The Brazilian Journal of Infectious Diseases. Iran,.6(5), 2002,258-262. 8. DA SILVA SANTOS,C; BRODSKYN,C. The Role Of CD4 And CD8 T Cell In Human Cutaneous Leishmaniasis, Frontiers in Public Health Infectious Diseases, Brazil, Vol.2, 2014,1-4. 9. DAS,V; RANJAN,A; BIMAL, S; SIDDIQUE,N; PANDEY, K; KUMAR, N; VERMA, N; SINGH, V; SINHA, K; BHATTACHARYA, S. Magnitude of unresponsiveness to sodium stibogluconate inthe treatment of visceral leishmaniasis in Bihar. The National Medical Journal Of India Vol. 18, N O. 3, 2005. 10. DWIVEDI,G; GARG,D; GUPTA,A; PATNIA. Cytodiagnosis of cutaneous leishmaniasis- a case report. Asian Pacific Journal Of Health Sciences, 1(4S) 2014,20-22. 11. ESTRIDGE,B; RENOLDS, A; WALTERS,N. Basic Medical Laboratory Techniques. 4 Edition. USA, 2000. 12. FARAH, F; LAZARY, S; WECK, A. The Effect of Leishmania Tropica on Stimulation of Lymphocytes With Phytohaemaglutinine. Immunology Switzerland,,Vol. 30, 1976, 629-634 13. ISSABEAGLOO, E; KERMANIZADEH, P; AHMADPOOR, F; TAGHIZADIEH, M. Eosinophil and Mast Cells in Leishmaniasis. Annals of Biological Research. Iran,Vol. 2, No.6, 2011,36-41. 14. KEMP K.Cytokine-Producing T Cell Subsets in Human Leishmaniasis Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, Vol48, 2000, 173 176. Denmark. 15. KELES,H ;SELEK S;GUZEL, H; CELIK, H;EREL, O. Increased DNA damage and oxidative stress in patients with cutaneous leishmaniasis, Mutation Research, Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis, Vol.585, 2005, 71 78. 16. LAMBERTZ U, SILVERMAN, J, NANDAN D, MCMASTER W, CLOS J, FOSTERREINER L Secreted virulence factors and immune evasion in visceral leishmaniasis, Journal of Leukocyte Biology, Germany, Vol.91, 2012, 887-900. 17. MATTE, C; OLIVIER, M. Leishmania -Induced Cellular Recruitment during the Early Inflammatory Response: Modulation of Proinflammatory Mediators. The journal of infectious disease, Canada, Vol.185, 2002,673-681. 18. MAPAR,M; OMIDIAN, M. Intralesional Injections Of Metronidazole Versus Meglumine Antimoniate For The Treatment Of Cutaneous Leishmaniasis. Jundishapur Journal of Microbiology, IRAN,, Vol3.No2, 2010,79-83. 19. MIAH, A; SALAM, A; HAQUE, A;AZAD,A; HAQUE,E; ISLAM, Q; EKRAM S. Evaluation of Adverse Effects of Sodium Stibogluconate in the Treatment of Visceral Leishmaniasis, Kyamc Journal, India. Vol. 3, No. 1, 2012, 239-243. 20. NETTO, M; WEYNBERGH,J. CD16 monocytes in human cutaneous leishmaniasis: increased ex vivo levels and correlation with clinical data.. Journal of Leukocyte Biology Brazil Vol 79, 2006. 21. OLIVIER, M; GREGORY, D; FORGET G. Subversion Mechanisms by Which Leishmania Parasites Can Escape the Host Immune Response: a Signaling Point of View. Clinical Microbiology, Vol.18.No2. 2005,293 305. 22. PASSWELL,J; SHOR, R; KEREN, G; EL-ON, J. Human Monocytes Infected with Leishmania Amastigotes Enhance Lymphocyte Proliferation. Clin. Exp. Immunol. Vol. 60,1985, 565-571 23. PETERSON E; FRANKLIN,A; NEVA, F; OSTER,C; DIAZ, H. Specific Inhibition of Lymphocyte-Proliferation Responses by Adherent Suppressor Cells in Diffuse Cutaneous Leishmaniasis. N.Engl. J. Med, USA,Vol.306, 1982, 387-392. 283

تغي ارت صيغة خاليا الدم البيض وأشكاليا أثناء اإلصابة وبعد الشفاء من داء الميشمانيا الجمدية عند اإلنسان مرة, سممان, ديب 24. QUEIROZ, M; ALVES,J; Correia,J. Visceral Leishmaniasis: Clinical And Epidemiological Features Of Children In An Endemic Area. Journal de Pediatric Brazil, Vol. 80, No.2, 2004,141-146. 25. REED,S; CARVALHO,E; SHERBERT,C; SAMPALO, D; RUSSO, D; BACELAR,O;PIHL,D;SCOTT,J; BARRAL,A; GRABSTEIN,K; JOHNSON,W. In Vitro Responses to Leishmania Antigens By Lymphocytes From Patients With Leishmaniasis Or Chagas Disease. the American society for clinical investigation USA,Vol.85,1990, 690-696 26. RAI, M; MUHAMMAD Z; SARWAR, J; QURESHI, A. Haematological Finding in Relations to Clinical Findings of Visceral Leishmaniasis in Hazara Division. Ayub. Med. Coll,Pakistan, Vol.20, No.3, 2008, 40-44. 27. REITHINGER,R; DUJARDIN,J; LOUZIR,H; PIRMES,C; ALEXANDER,B; BROOKER,S. Cutaneous Leishmaniasis. The lancet infectious diseases. USA, Vol. 7, 2007, 581-596. 28. SHARMA, U; SINGH,S. Insect Victor of Leishmania :Distribution,physiology. And Their Control. J Vector Borne Dis.India, Vol.45, 2008,255-272 29. SHARMA, U; SINGH, S. Immunobiology Of Leishmaniasis. Indian Journal Experimental Biology India,Vol.47, 2009, 412-423. 30. THEML, H; DIEM, H; HAFERLACH, T; Color Atlas of hematology. Thieme Verlag Rüdigerstraße 14, Germany, 2004. 31. UZONNA, J; LIU,D. The Early Interaction of Leishmania with Macrophages and Dendritic Cells and Its Influence on The Host Immune Response. Front. Cell. Inf. Microbio, Canada, Vol.10,2012. 32. VERGEL,C; PALACIOS, R; CADENA,H; POSSO,C; VALDERRAMA,L; PEREZ,M; WALKER;J, TRAVI;B, SARAVIA;N. Evidence For Leishmania [Vienna]Parasite In The Skin And Blood Of Patient before and after Treatment. Journal of Infectious Diseases, Colombia,Vol.194, 2006, 503-511. 33. WORLD HEALTH ORGANIZATION. Consultative Meeting of Cutaneous Leishmaniasis. Geneva. 2007. 284